Fruisce da
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119643_2 TECNICHE BIOMOLECOLARI in Biologia sperimentale e bioinformatica LM-6 PROIETTI Silvia
(programma)
Parte Teorica (32 ore) Manipolazione acidi nucleici e proteine e relativa analisi: Isolamento di DNA, RNA e proteine da campioni biologici; esempi ed applicazioni. DIGE. Tecniche per l'analisi dell'espressione genica: Real-time PCR. Microarrays- analisi dati ed applicazioni. RNA-Seq. Analisi delle interazioni proteina-proteina: Far-Western, Pull-down, yeast-two/three hybrid assay, Co-Immunoprecipitazione, Tandem Affinity Purification (TAP) system, Phage Display, Bimolecular Fluorescent Complementation (BiFC), FRET. Analisi delle interazioni DNA/RNA-proteina: Saggio di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP e ChIP-on-chip). EMSA. Southwestern. DNA pull-down. PiCh. Yeast-three hybrid assay. Metodi per lo studio delle modifiche epigenetiche: Analisi della metilazione del DNA mediante Methylation-Sensitive Amplification Polymorphism (MSAP), Bisulfite (non methylation)-specific PCR e Methylation-specific PCR (MSP). ATAC-Seq. Analisi delle modifiche istoniche mediante ChIP. Tecniche di mutagenesi e genome editing: Metodi di mutagenesi sito-specifica, CRISPR-Cas9 System. Applicazioni della PCR in campo diagnostico. Next Generation Sequencing: piattaforme per il sequenziamento di seconda e terza generazione. Durante il corso verranno utilizzati tools bioinformatici per predizioni in silico di interazione fra biomolecole, o come complementari per l’utilizzo delle tecniche trattate (per preparazioni di input o analisi di output)
Parte Pratica (16 ore) Estrazione di RNA totale, RT-qPCR. Estrazione di DNA genomico. Analisi metilazione DNA. Estrazione proteine totali e saggi di interazione proteina-proteina.
(testi)
Amaldi F, Benedetti P, Pesole G, Plevani P. Tecniche e metodi per la biologia molecolare, ed 2020, Zanichelli. Brown T.A. Biotecnologie molecolari, principi e tecniche. Seconda ed., 2017, Zanichelli. Lesk A.M. Introduzione alla Genomica. Prima ed., 2009, Zanichelli.
Slides illustrate a lezione e disponibili sulla piattaforma didattica. Per le attività pratiche vengono fornite dispense dal docente. Gli studenti non frequentanti sono incoraggiati a contattare il docente per avere informazioni sul programma, sui materiali didattici e sulle modalità di valutazione del profitto.
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