Docente
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PROIETTI Silvia
(programma)
Parte Teorica (32 ore) Manipolazione acidi nucleici e proteine e relativa analisi: Isolamento di DNA, RNA e proteine da campioni biologici; esempi ed applicazioni. DIGE. Tecniche per l'analisi dell'espressione genica: PCR, qPCR, RT-qPCR. Microarrays- analisi dati ed applicazioni. RNA-Seq. Analisi delle interazioni proteina-proteina: Far-Western, Pull-down, yeast-two/three hybrid assay, Co-Immunoprecipitazione, Tandem Affinity Purification (TAP) system, Phage Display, Bimolecular Fluorescent Complementation (BiFC), FRET. Analisi delle interazioni DNA/RNA-proteina: Saggio di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP e ChIP-on-chip). EMSA. Southwestern. DNA pull-down. PiCh. Yeast-three hybrid assay. Metodi per lo studio delle modifiche epigenetiche: Analisi della metilazione del DNA mediante Methylation-Sensitive Amplification Polymorphism (MSAP), Bisulfite (non methylation)-specific PCR e Methylation-specific PCR (MSP). Analisi delle modifiche istoniche mediante ChIP. Tecniche di mutagenesi e genome editing: Metodi di mutagenesi sito-specifica, CRISPR-Cas9 System. Applicazioni della PCR in campo diagnostico. Next Generation Sequencing: piattaforme per il sequenziamento di seconda e terza generazione.
Parte Pratica (16 ore) Estrazione di RNA totale, RT-qPCR. Estrazione di DNA genomico. Analisi metilazione DNA. Estrazione proteine totali e saggi di interazione proteina-proteina.
(testi)
Brown T.A. Biotecnologie molecolari, principi e tecniche. Seconda ed., 2017, Zanichelli editore. Watson J.D., Caudy A.A., Myers R.M., Witkowski J.A. DNA ricombinante. Seconda ed., 2008, Zanichelli editore. Lesk A.M. Introduzione alla Genomica. Prima ed., 2009, Zanichelli editore.
Slides illustrate a lezione e disponibili sulla piattaforma didattica. Per le attività pratiche vengono fornite dispense dal docente. Gli studenti non frequentanti sono incoraggiati a contattare il docente per avere informazioni sul programma, sui materiali didattici e sulle modalità di valutazione del profitto.
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