Docente
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TIMPERIO Anna Maria
(programma)
Scienze OMICHE applicate Docente: Prof Anna Maria Timperio Definizione di scienze "omiche", Descrizione del programma e delle modalità dell'esame. Norme di sicurezza da adottare nei laboratori scientifici. Proteomica definizione: Proteomica di espressione e funzionale, strategie di analisi proteomica. Elettroforesi nativa (BLUE-NATIVE gel), mono e bi-dimensionali (1D-GEL, 2D-GEL). Iso-elettro-focusing (IEF) Cromatografia a fase inversa RP-HPLC. Applicazioni della proteomica per lo studio di cellule tumorali e per la diagnosi precoce per la presenza di biomarcatori (esempi) Laboratorio 1, Estrazione proteica da materiale da definire. Determinazione della concentrazione proteica (metodo Brendford). Uso dello spettrofotometro Laboratorio 2. Elettroforesi mono dimensionale (1D-SDS-PAGE). Taglio delle bande dal gel e digestione in tripsina (Label Free) Laboratorio 3. HPLC a fase inversa: costruzione di un gradiente. Determinazione della pendenza e studio del cromatogramma Metabolomica definizione: Tecniche di preparazione dei campioni per l’analisi del metaboloma. Metodi cromatografici e di spettrometria di massa utilizzati per caratterizzare metaboliti aventi funzione di biomarker Esempi di studi di metabolomica in ricerche cliniche: Applicazione della metabolomica nello studio dell autismo Lipidomica definizione principali lipidi e loro determinazione in spettrometria di massa, determinazione dei lipidi di membrane di globuli rossi Foodomica definizione. determinazione di flavonoidi, vitamine in alimenti -Laboratorio 4 . Estrazione dei metaboliti secondo il metodo di (Bligh & Dyer) Spettrometria di Massa :Generalità. Principali sorgenti, analizzatori e detector. Analisi di proteine, peptidi, metaboliti, lipidi in massa intatta. Massa tandem: significato e scopi - Laboratorio 5. Determinazione della massa intatta di una proteina. Determinazione della sequenza amino-acidica con spettrometria di massa (nanoESI-TRAP), Determinazione dei principali classi lipidiche in spettrometria ORBITRAP, Determinazione dei flavonoidi in spettrometria MALDI TOF Riduzione della complessità: Frazionamento subcellulare. Lisi delle cellule e omogeneizzazione dei tessuti. Separazione delle frazioni subcellulari. Proteomica, metabolomica e lipidomica delle membrana Proteomica, metabolomica, lipidomica degli organelli e dei compartimenti intracellulari. Immunoprecipitazione Immunoprecipitazione per ridurre la complessità di un campione per la spettrometria di massa. Proteomica Funzionale e Immunoprecipitazione
(testi)
Non essendo ancora in commercio un testo specifico, l'insegnante avrà cura di segnalare articoli e riviste opportune nel corso dell'anno.
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